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小色哥妹 DC细胞全面处理决议
发布日期:2024-11-02 13:35    点击次数:196

小色哥妹 DC细胞全面处理决议

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树突细胞左证其独到形式而得名,是一组分散世俗、由骨髓开始的、具有迁徙智商的免疫细胞小色哥妹,是现在功能最宏大的抗原递呈细胞(APC),亦然能活化静息型T细胞(Naïve T cells)的APC,引起T细胞低级免疫应付。

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一、  树突状细胞分化发育、功能   1、DC树突状细胞的分化发育Overview 2、Pathways of human dendritic cell (DC) development   3、Regulation of DC development and homeostasis in mice   4、DC controllers of adaptive immunity DC与得到性免疫之间的联系     二、  树突细胞分群   1、Phenotype of human DC subsets   2、Phenotype of mouse lymphoid and nonlymphoid tissue DC 三、  树突细胞workflow   1、若何获取DC细胞? (1)使用CD34、CD133磁珠分选得到高纯度造血干细胞,体外培养,指导成DC细胞; (2)磁珠分选单核细胞(CD14+)指导成DC细胞; (3)使用BDCA1、4、3平直分选DC细胞 ( BDCA-1(CD1c) DC Iso kit; CD304( BDCA-2) MicroBeads, kit; CD141(BDCA-3) MicroBeads, kit);   所需产物: 用途 产物编号 称呼 规格 分选PDC用磁珠 130-090-509 CD303 (BDCA-2) MicroBead Kit, human Kit 130-097-240 Diamond Plasmacytoid Dendritic Cell Isolation Kit II, human Kit 分选MDC1用磁珠 130-119-475 CD1c (BDCA-1)+ Dendritic Cell Isolation Kit, human Kit 分选MDC2用磁珠 130-090-512 CD141 (BDCA-3) MicroBead Kit,小色哥奇米在线 human Kit 分选单核细胞磁珠 130-050-201 CD14 MicroBeads, human 2mL 分选造血干细胞磁珠 130-100-453 CD34 MicroBead Kit UltraPure, human 2mL 130-094-913 Diamond CD133 Isolation Kit, human 2mL   Mo-DC指导用细胞因子 130-093-919 Human IL-4, premium grade 5μg 130-093-864 Human GM-CSF, premium grade 10μg 130-093-897 Human IL-1β, premium grade 10μg 130-094-015 Human TNF-α, research grade 10μg

130-095-365

Human IL-6, research grade 10μg 130-096-481 Human IFN-γ1b, premium grade 10μg 2、Mo-DC Workflow Day 0   区别出的单核细胞(3×108 cells)用3 mL的透顶培养基(RPMI 1640, 2 mM L-glutamine, 1% autologous plasma),添加250 IU/mL IL-4 、800 IU/mL GM-CSF进行培养。 Day 2   从培养体系吸出1.5 mL,è?离心。用1.5 mL透顶培养基加2倍浓度的IL-4和 GM-CSF,再添加到原培养体系中 Day 6   从培养体系吸出1.5 mL,离心。用1.5 mL培养基(添加2000 IU/mL IL-6, 400 IU/mL IL-1β, 2000 IU/mL TNF-α, 2 µg/mL PGE2),再添加到原培养体系中,培养24小时。 Day 7   通过流式检测练习Mo-DCs (mMo-DCs)的活性为95.4±2.4%,得率为23%。   3、MLR羼杂淋巴细胞响应     4、DC细胞亚群分析 Panel一:东谈主DC细胞亚群坚毅: 4-Color Assay; R3:  lin-HLA-DR-CD123+嗜碱性粒细胞; R4:lin-HLA-DR+CD123+淋巴系细胞DC(DC2); R5:lin-HLA-DR+CD11C+髓系DC(DC1) Panel二:小鼠DC细胞亚群坚毅: reference : 1:Alexander M. Steffen J(2014)Development and Function of Dendritic Cell Subsets.Immunity Review 2: Barbara U. Caetano R.(2015)Defining dendritic cells Current Opinion in Immunology 2015, 32:13–20 3:Miriam M. Priyanka S. Julie H. Jennifer M. and Arthur M.(2013)The Dendritic Cell Lineage: Ontogeny and Function of Dendritic Cells and Their Subsets in the Steady State and the Inflamed Setting Annu Rev Immunol. 2013 ; 31  

 



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